概述

PNGase F 是一種酰胺酶，切割糖蛋白上的 N-連接糖，切割的糖型有：高甘露糖、雜合和復(fù)雜寡糖，切割位點(diǎn)為：內(nèi)側(cè)的 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之間。PNGase F 還提供不含甘油的形式，便于在 HPLC 方法中取得*效果。

來源

NEB #P0704 和 NEB #P0705 是從腦膜敗血性黃桿菌（Flavobacterium meningosepticum）中提取純化。

NEB #P0708 和 NEB #P0709 *自和平空間站伊麗莎菌（Elizabethkingia miricola，formerly Flavobacteriummeningosepticum）并在 E. coli 中高度表達(dá)。

反應(yīng)條件

將糖蛋白于 1X 糖蛋白變性緩沖液（含 0.5% SDS，40mM DTT）中 100℃ 煮沸 10 分鐘使其變性，再在加入1% NP-40 的 1X GlycoBuffer 2 反應(yīng)緩沖液中，37℃ 溫育進(jìn)行反應(yīng)。熱失活：75℃ 10 分鐘。

隨酶提供的試劑

10X 糖蛋白變性緩沖液

10X GlycoBuffer 2 緩沖液

10% NP-40

分子量

36,000 daltons。

質(zhì)量保證

無(wú)糖苷外切酶污染，無(wú)糖苷內(nèi)切酶 F1、F2和 F3 活性，無(wú)蛋白水解活性。

單位定義

1 單位指 10 μl 的反應(yīng)體系中，37℃ 條件下 1 小時(shí) 從 10 μg 變性 RNase B 中除去超過 95%的碳水化合物所需要的酶量（65 NEB units = 1 IUB milliunit）。

濃度

500,000 units/ml。

注意事項(xiàng)

已知 PNGase F 的活性受 SDS 的抑制，所以在反應(yīng)混合物中必須加入 NP-40。要使天然糖蛋白去糖基化，建議增加酶量并延長(zhǎng)溫育時(shí)間。

要使非變性糖蛋白去糖基化，建議增加酶量并延長(zhǎng)溫育時(shí)間。